在进行点样时,应注意以下事项:
点样量应适中,一般为0.5~10μl,样品的浓度通常为0.5~2mg。点样量太浓会导致展开剂从原点外围绕行而不是通过整个原点,使斑点脱尾或重叠,降低分离效率;点样量太小则不能检出清晰的斑点,影响判断。
样品在溶剂中溶解度很大时,原点将变成空心圆,影响随后的线性展开。因此,应选择对被测成分溶解度适中且不是很大的溶剂。同时,需要除去原点残存的溶剂,尤其是亲水性溶剂,以免吸收大气中的水分影响色谱质量。
点样时应确保几个样点在一条直线上,大小要合适(斑点直径一般不超过2mm),间距5~6mm。点样器垂直接触薄层板表面以防止损伤板面。
点样用的毛细管不能交叉使用,以确保样品的纯净性。毛细管在板上接触时间不宜过长,一般点样直径在2~3mm左右,若毛细管直径过粗,则样直径过大,影响色谱分离效果。
若溶液太稀,一次点样可能不够,需重复点样。但应待前次点样的溶剂挥发后方可重点,以防样点过大,造成拖尾、扩散等现象。
点样结束后,待样点干燥后方可进行展开。点样要轻,不可刺破薄层。
室内温度尤其不能太潮湿,以免影响薄层板的活性和色谱质量。
样品在检测前应保持纯净,避免受到污染或发生变化。采样工具应清洁,避免将有害物质带入样品中。
盛样容器可根据要求选用硬质玻璃或聚乙烯制品,容器上要贴上标签,并做好标记。
通过遵循以上注意事项,可以提高点样的准确性和可靠性,从而确保薄层色谱或其他相关实验的顺利进行。